常規PCR Kit （一步法）

Venor®Gem OneStep

常規PCR Kit（一步法）介紹：

常規PCR法：是根據支原體(ti)核糖體(ti)16s-23s rRNA的特異保守序列設計引物(wu)，對待檢(jian)樣本DNA進行擴(kuo)(kuo)增，通過(guo)對擴(kuo)(kuo)增產(chan)物(wu)的大小分(fen)析(xi)作出診斷。

優點(dian)：①靈敏度高，特異性好。②時(shi)間(jian)短，2-3小(xiao)時(shi)出(chu)結果(guo)。③符合歐洲藥典。④操(cao)作簡單。

缺點：①對于已(yi)做支(zhi)原體滅活處理的樣(yang)品(pin)，由于支(zhi)原體DNA仍舊(jiu)存(cun)在(zai)(zai)其(qi)中，PCR結果會(hui)出現假陽性。（可(ke)用培養(yang)法做補充驗(yan)證）。②不同廠家生(sheng)產(chan)的試劑盒(he)質量差異巨大（由于引物及內在(zai)(zai)設計不同），需謹慎選擇，盡量在(zai)(zai)專(zhuan)業人員推薦指導(dao)下使用。

『支(zhi)原體常規(gui)PCR檢測(ce)試劑盒』介紹(shao)：

德(de)國MB公司生產的支原體(ti)常規PCR檢測試(shi)劑(ji)盒，依據操作步(bu)驟的細微差別，分一(yi)步(bu)法(fa)和經(jing)典法(fa)兩類(lei)。此兩類(lei)試(shi)劑(ji)盒較全球其他(ta)廠家同類(lei)產品，具有以下*的優點：

①高特(te)異(yi)性(xing)，270bp左(zuo)右的一條陽(yang)性(xing)對照條帶，涵蓋了所有(you)可能感染細(xi)胞的支(zhi)(zhi)原(yuan)(yuan)體(ti)(ti)(ti)物種，操作簡單(dan)，結果(guo)易于觀察。（使用MB的試(shi)劑(ji)盒(he)，下表列出(chu)(chu)的支(zhi)(zhi)原(yuan)(yuan)體(ti)(ti)(ti)物種均為陽(yang)性(xing)，其他微生物或真核細(xi)胞均為陰性(xing)。根據16s rRNA序(xu)列的同源(yuan)性(xing)比對，該試(shi)劑(ji)盒(he)可檢測出(chu)(chu)1種脲原(yuan)(yuan)體(ti)(ti)(ti)、7種無膽甾原(yuan)(yuan)體(ti)(ti)(ti)和(he)85種支(zhi)(zhi)原(yuan)(yuan)體(ti)(ti)(ti)。）

②高靈敏度，1-5拷貝(bei)/μl的支(zhi)原體DNA即可檢(jian)出。

③試(shi)劑盒含內控(kong)對照(zhao)，可防止假陰性的(de)發生(sheng)。

④符合(he)歐洲藥典要求。

常規PCR Kit（一步法）適用范圍：

A. 科研用戶，細胞上清的(de)篩查可(ke)選用MB公司生產的(de)支(zhi)原體(ti)常規PCR檢(jian)測試(shi)劑盒（一(yi)步法(fa)）。（詳見下(xia)文）

【Venor® Gem OneStep (貨號:11-8050)】或(huo)【Venor® Gem Advance (貨號: 11-7096)】

B. 對(dui)于需遵(zun)循藥典(dian)要求的生物(wu)制藥企業，可選用MB公司生產的支原(yuan)體常規PCR檢測(ce)試劑盒（經(jing)典(dian)法(fa)）。

【Venor® Gem Classic(貨號: 11-1050) 】+ Taq酶  (貨號: 53-1050)】

或【Venor® Gem Classic  (貨號: 11-1050G)】

特點：

1. 內控對照已加在預混液中，無需另外配置，使用便捷。
2.高特(te)異性，僅一(yi)條陽性對照條帶(dai)，即可(ke)涵蓋(gai)所有可(ke)能感染細胞的(de)支原(yuan)體物種(zhong)。

操(cao)作簡單，易于觀(guan)察。

3.高靈敏度，1-5拷貝/μl的支原體DNA即可檢出。
4.歐(ou)洲藥(yao)典要求的(de)26種(zhong)支原體均(jun)可檢出。該試劑(ji)盒可檢測(ce)出1種(zhong)脲(niao)原體、7種(zhong)無膽甾原體和85種(zhong)支原體。

操作步驟：

下列(lie)圖示以Venor® Gem OneStep?支(zhi)原體(ti)?常規PCR?檢測試劑(ji)盒(he)?(一步(bu)法)( 貨(huo)號：11-8050)  為(wei)例，具體(ti)產品操作以說(shuo)明書為(wei)準。

第1步：樣本處理

第2步：試劑制備

第3步(bu)：PCR體系建(jian)立

第(di)4步：啟動PCR反應

第5步：電泳(yong)結果(guo)分析

191bp為內控對照條帶，表明PCR反應正常。

當樣本(ben)存在(zai)支原體污染時，由于內(nei)控對照(zhao)(zhao)與支原體DNA存在(zai)競爭，內(nei)控對照(zhao)(zhao)條帶(dai)變弱（例如支原體DNA＞103拷貝）。

陽性對照中支原體(ti)DNA＞104拷貝，內控對照條帶會*消失。

可能在80-90bp存在引(yin)物自退火形成的條帶(dai)，此條帶(dai)不(bu)影響檢測結果(guo)。

如果待測樣(yang)本對(dui)PCR產生(sheng)抑制，則內控對(dui)照(zhao)條帶變弱（和陰(yin)性(xing)對(dui)照(zhao)相比(bi)），此時應(ying)先進(jin)行(xing)DNA抽(chou)(chou)提（推薦使用：Venor® Gem Sample Preparation Kit 支原(yuan)體(ti)DNA抽(chou)(chou)提試(shi)劑盒），然后再檢測。

儲存條件

2~8℃至少12個月。復溶(rong)后必須在-18℃保存。

效期

1年6個月