常規PCR Kit （經典法）(含Taq酶）

Venor® Gem Classic

特點

1.內控(kong)對照為獨立(li)包裝，遵循(xun)歐洲藥典和(he)日本藥典操作流(liu)程。

2.高特異性(xing)，僅一(yi)條陽性(xing)對(dui)照條帶，即可涵蓋(gai)所(suo)有可能感染(ran)細胞的支原體物(wu)種。操作(zuo)簡單，

易(yi)于觀察。

3. 高靈敏度，若PCR反應(ying)體系加入10μl樣本，支原體檢測限度(du)為≤5或(huo)≤10CFU。

(詳見(jian)下文“(2)Venor® Gem Classic Kit 10種常見(jian)支原體檢測(ce)限“)

4.歐洲藥典要求的26種(zhong)支(zhi)原體(ti)均可(ke)檢出。該試劑盒可(ke)檢測出1種(zhong)脲原體(ti)、7種(zhong)無(wu)膽(dan)甾原體(ti)和85種(zhong)支(zhi)原體(ti)，與細菌(jun)和真核DNA無(wu)交叉反應。

5.試(shi)劑盒內(nei)包含Taq酶，無需另(ling)外購(gou)買。

Venor® Gem Classic Kit

10種常(chang)見(jian)支原體檢測(ce)限

操(cao)作步驟

第1步：樣本處理

a. 細胞(bao)培養上(shang)清(qing)

b. 生物藥或需遵循(xun)藥典的樣本

說明：①樣品(pin)基質可能會影響(xiang)檢測(ce)的靈敏度。收集和篩選更(geng)高的樣品(pin)量(liang)可提(ti)高測(ce)定靈敏度。

  ②細(xi)胞培養(yang)物(wu)樣本含豐富的DNA酶，在(zai)低溫(wen)下(xia)也能(neng)降解支(zhi)原DNA，影響檢測(ce)靈敏度。

建議(yi)：樣本做DNA抽提處理，實現最高靈敏度。

推(tui)薦(jian)：德國MB公司生產的專用支原(yuan)體DNA提取試(shi)劑盒Venor® Gem Sample Preparation Kit該DNA抽提試(shi)劑盒已經過廣泛驗證。

第2步：試劑制備

第3步：PCR體系建(jian)立(li)

a. 細胞培養上清

b. 生物(wu)藥或需遵循藥典的樣(yang)本(ben)

第4步：啟動PCR反(fan)應

第5步：電泳結果分(fen)析

191bp為內控對照條帶，表明(ming)PCR反應正常。

當樣(yang)本(ben)存(cun)在支原(yuan)體污染時，由于內控對照與支原(yuan)體DNA存(cun)在競(jing)爭，內控對照條帶變弱（例如支原(yuan)體DNA＞103拷貝(bei)）。

陽(yang)性對(dui)照中支原(yuan)體DNA＞104拷(kao)貝，內控對(dui)照條帶會*消失。

可能(neng)在80-90bp存在引物(wu)自退火(huo)形成的條(tiao)帶，此條(tiao)帶不影響檢測結果。

如果(guo)待測樣本對(dui)PCR產(chan)生抑制，則內控(kong)對(dui)照條帶變弱（和陰性(xing)對(dui)照相比），此時應先進行DNA抽(chou)提(ti)（推薦使(shi)用：Venor® Gem Sample Preparation Kit 支原(yuan)體DNA抽(chou)提(ti)試劑(ji)盒，詳見第25頁），然后再(zai)檢測。

儲存條件

2~8℃至少6個(ge)月。復(fu)溶后在-18℃保存。